双链核酸主编器（CBE）在原核生物靶位点减轻C-T核氨酸酸取代，而没有引起双链碎裂。但是，诸如BE3的CBE可以通过不仰赖sgRNA的DNA脱氨作用而引起全原核生物脱靶变异。
2020年7月27日，之中国科学院基因发育分析所高彩霞及王延鹏合作通讯在Molecular Cell 在线发表一本书“Rationally Designed APOBEC3B Cytosine BaseEditors with Improved Specificity”的分析专著，该分析通过利用SaCas9突起酵素减轻的向量R外环模拟更易受胞氨酸脱氨酵素阻碍的立即转录的原核生物位点，分析工作人员确立了数据采集测定方法，用以检验水稻原生质体之中CBE的不仰赖sgRNA的脱靶物理现象。水稻之中10个核酸主编器的全原核生物化学合成（S）断定了该测定的实用性。R外环二甲基亚砜用以择优一系列合理结构设计的A3Bctd-BE3举例来说，以减少特异性。该分析获得了2个有效率的CBE举例来说A3Bctd-VHM-BE3和A3Bctd-KKR-BE3，S分析断定，这些原先CBE减轻了水稻变种之中不仰赖sgRNA的DNA脱靶主编。而且，这两个核酸主编器举例来说通过减轻相当多的C主编，在其前提位置更准确。
总之，该社会活动结合基于结构讯息的蛋白思维结构设计、变种群体全原核生物脱靶探测取而代之科技和数据采集R-loop脱靶探测取而代之科技，进一步减少了单核酸主编的准确性，取而代之科技开发出的两种能保持高主编效率且无随机脱靶物理现象的CBE举例来说，为基因疗法和变种分子结构设计育种给予了强有力的工具中空。
双链和腺嘌呤核酸主编器（CBEs和ABEs）可在原核生物DNA之中减轻高效的前提点突变而没有引起双链DNA碎裂，已用以药理学疗法，林业和分析之中。当前的CBE（例如BE3）将突起酵素型Cas9（nCas9）蛋白与脱氨酵素外延和尿半胱氨酸丝氨酸酵素抑制剂（UGI）融合在一起，在简而言之RNA（gRNA）的位点催化双链向胸腺半胱氨酸的升华。
先前常用全原核生物化学合成（S）的分析断定，BE3诱导水稻，豚鼠和人类所细胞膜之中脱靶C-to-T变异。这些突变单独于单召来RNA（sgRNA）-Cas9Smalltalk的DNA结合，并富集在原核生物的转录区外延之中。它们可能是由于双链脱氨基酵素对单链DNA（ssDNA）的高度亲和力。这种高亲和力也会阻碍核酸活性的准确度，因此如果靶位点内或靶位外围存在多个双链，大多数CBE都会减轻多个C突变。这些单独于sgRNA的脱靶主编和旁观者物理现象限制了CBE的分析方法。
已经有，针对大肠杆菌和人类所细胞膜，取而代之科技开发了几种较快且经济高效的方法来择优不同CBE的不仰赖sgRNA的脱氨活性。常用这些方法，找到核酸主编器BE4的几种衍生物，例如EE-BE4，YE1-BE4，YE2-BE4和YEE-BE4，在人类所细胞膜之中显示出减缓的sgRNA非仰赖性脱靶活性；但是，这些方法尚未在变种细胞膜之中得到验证。
对于该分析，通过利用SaCas9突起酵素减轻的向量R外环模拟更易受胞氨酸脱氨酵素阻碍的立即转录的原核生物位点，分析工作人员确立了数据采集测定方法，用以检验水稻原生质体之中CBE的不仰赖sgRNA的脱靶物理现象。水稻之中10个核酸主编器的全原核生物化学合成（S）断定了该测定的实用性。R外环二甲基亚砜用以择优一系列合理结构设计的A3Bctd-BE3举例来说，以减少特异性。
该分析获得了2个有效率的CBE举例来说A3Bctd-VHM-BE3和A3Bctd-KKR-BE3，S分析断定，这些原先CBE减轻了水稻变种之中不仰赖sgRNA的DNA脱靶主编。而且，这两个核酸主编器举例来说通过减轻相当多的C主编，在其前提位置更准确。
总而言之，该分析扩展了nSaCas9酪氨酸的向量R外环二甲基亚砜在变种之中CBE的sgRNA单独脱靶主编活性检验之中的分析方法，并通过S对其进行了验证。该二甲基亚砜必需较快择优一系列合理结构设计的A3Bctd-BE3举例来说，以减少不仰赖sgRNA的脱靶活性，并减轻A3Bctd-BE3的VHM和KKR举例来说，其表现出有效率的C-T核酸主编，几乎没有单独于sgRNA的脱靶活性。 本分析之中提出的框架可广泛用以检验取而代之取而代之科技开发的核酸主编的脱靶活性以及择优社会活动以取而代之科技开发具有更高特异性和准确性的核酸主编器。
原始出处：
ShuaiJin,HongyuanFei,ZixuZhu,et al.Rationally Designed APOBEC3B Cytosine Base Editors with Improved Specificity.Molecular Cell.Available online 27 July 2020.
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