亲和素-生物素系统，如何减少干扰，能够地应用于免疫检测

1. 什么是亲和伦-NAD控制系统

（肽键霉）亲和伦-NAD是免疫验证中都惯用的波形放大控制系统。亲和伦是蛋清中都常见的糖类蛋白，由四个相同的位点合组。每一个位点都包含一个NAD转立体化底物，因此一个理论上正常的亲和伦尽可能转立体化4个NAD。亲和伦与NAD具有更加强烈的亲和力，其解离常数大有约是1.3*10-15M，是已知微生物中都最弱的非共价耦合之一。亲和伦的蛋白质构件更加平衡，即使在pH极低8M的尿伦氯化钠中都，也尽可能维持构件的完整性，保有对NAD的亲和力。并且在转立体化NAD后，亲和伦-NAD构件的平衡性进一步增强，研究表明，即使在pH为8M的盐酸胍中都，亲和伦-NAD位点无论如何尽可能平衡普遍存在。另外，亲和伦-NAD的转立体化与抗病毒体-抗病毒原的转立体化类似，有极佳的免疫，尽可能在复杂的氯化钠状况中都相互转立体化，因此，亲和伦-NAD控制系统普遍应用在免疫验证中都。其中都应用相当普遍的方式是将亲和伦；也在磁珠表层，NAD标示出新抗病毒体。

△NAD磁珠，NAD立体化抗病毒体免疫验证示意由此可知

2. 亲和伦，肽键霉亲和伦，以及中都性亲和伦

亲和伦蛋白是盐类磷脂质，聚合度有约为67kDa，蛋白质等电点有约为10。由于蛋白质等电点较高，在pH中都性条件下，亲和伦带正电荷。并且亲和伦普遍存在寡糖成分（主要由甘露糖和N-乙酰氨基合组的异质构件），不易与细胞核表层、核酸、凝集伦等气态产生非免疫转立体化，遭受本底过高的难题。肽键霉亲和伦是由肽键霉菌中都表达纯立体化出新的蛋白，与亲和伦类似，肽键霉亲和伦也由半胱氨酸合组，每个复合都可以以极佳的亲和力转立体化一个NAD。多种不同的是，肽键霉亲和伦没有糖肽键，聚合度比亲和伦相比之下，大有约为53kDa，蛋白质等电点在6.8~7.5之间，非免疫吸附也比亲和伦要小很多。

另外一种普遍用作的亲和伦是中都性亲和伦（NeutrAvidin）。中都性亲和伦单单是去除糖肽键后的亲和伦，聚合度有约为60kDa，蛋白质等电点为6.3。由于去除了糖肽键，中都性亲和伦的非特性得到了极大的降低，同时又延续了亲和伦对NAD极佳的亲和力。

△几种亲和伦的性质对比

3. NAD及其衍微生物构件

NAD又被称作维生伦H，或者维生伦B7，是一种水溶性维生伦，其功能是在人体内物加入脂肪组织、糖、蛋白人体内等重要气态的生立体化底物。NAD普遍普遍存在与动物肝、肝、蜂蜜、蜂蜜中都。

△NAD分子构件由此可知

NAD聚合度有约为244，尽可能以共价键的形式，标示出新在抗病毒体蛋白的表层，而不阻碍蛋白质的类似物。因此普遍应用于蛋白标示出新，进而通过亲和伦-NAD控制了系统标示出新蛋白进行分离、富集、验证。

从前通过多种不同的新建方式，NAD有各种各样的衍微生物，NAD标示出新蛋白的核心技术也日趋成熟阶段。NAD衍微生物构件之外由NAD双环构件，戊酸侧肽键，间隔肩，以及底物官能团合组。其中都间隔肩的亲疏近岸，长度对于蛋白的标示出新效率，标示出新后NAD与亲和伦更进一步底物性有重要阻碍。如肽键霉亲和伦与NAD转立体化底物是一个背包型构件，广度大有约有0.9纳米。因此，NAD的间隔肩长度，并不需要阻碍到标示出新在蛋白表层的NAD是否尽可能进入亲和伦底物背包中都。在某些应用中都，长间隔肩的NAD具有更高的数据分析灵敏度。

△NAD衍微生物构件示意由此可知

△惯用NAD肩长及聚合度

4. NAD不良影响

微生物不良影响是亲和伦-NAD控制系统验证中都普遍普遍存在的难题。运用于亲和伦-NAD控制系统进行免疫验证时，如果待测检验中都存如果普遍存在高pH的基质NAD，将与NAD立体化抗病毒体竞争者转立体化亲和伦的转立体化底物，进而阻碍验证结果。

作为水溶性B族维生伦，NAD在人体内物主要经过肝脏人体内。正常人体血液中都NADpH范围大有约在0.28~0.55ng/mL，已远低于各类免疫验证还原剂捆中都宣称的产生不良影响的NADpH。但是日常补充NAD的人群不在少数，根据一项统计数字，美国大有约有15%的人群日常补充NAD。而一篇发表在ClinicalChemistry上的研究文献说明了，正常人在口服100mgNAD后1.5两星期，血液中都NADpH降至相比之下于，最低为762.52ng/mL，24两星期后，pH下降至最低71.59ng/mL，略低于许多验证还原剂捆宣称的NAD不良影响pH下限。而且依据多种不同的NAD摄入量，以及多种不同验证还原剂的效能，口服NAD后对验证的不良影响可能接下来至48两星期。

△各大控制系统受NAD不良影响统计数字分析。（注，为美国FDA登记概念设计）

由于之外不运用于NAD亲和伦控制系统，雅培的免疫验证还原剂之前以无NAD不良影响作为卖点之一。单单上在2011年登记的维生伦D验证还原剂中都，雅培运用于了NAD标示出新的维生伦D作为竞争者衍微生物，与鼠抗病毒NAD抗病毒体标示出新的吖啶亚胺作为标示出新物进行验证，因此也会在一定程度上受到NAD不良影响。

5. 抗病毒NAD不良影响的方法

理论上所有运用于亲和伦-NAD控制系统的验证还原剂捆都会受到NAD不良影响。目前有几种方法可以降低NAD不良影响，或者增加还原剂对NAD不良影响的耐受性。

最简单并不需要的方法是增加亲和伦的加入量，如加大亲和伦磁珠的pH，以增加底物框架对NAD的载重量，但是这种做法一般而言会增加还原剂的价格，而且优化的程度有限。另外一种有效的方法是提前结束将亲和伦反应物和NAD立体化反应物提前结束预混，让亲和伦再行与NAD立体化抗病毒体底物，进而提高检验中都基质NAD对底物的不良影响。诊断还原剂捆一般是运用于肽键霉亲和伦磁珠-NAD底物框架，因此在补救NAD不良影响的难题上，各大一些公司之前在创新进步，希望尽可能从核心技术上彻底补救这一难题。例如，近日列入的一项专利说明了，某一一些公司诊断联合开发出新一种抗病毒NAD不良影响的抗病毒体，尽可能免疫转立体化基质NAD，而对标示出新在抗病毒体表层的NAD不转立体化，因此可以作为抗病毒不良影响反应物去掉至底物框架中都，通过转立体化检验中都基质的NAD而提高不良影响。另外一种方法是运用于抗病毒NAD抗病毒体替代亲和伦类蛋白。如美国一家初创一些公司就联合开发出新了特定的抗病毒NAD抗病毒体，其对NAD的亲和力与亲和伦类蛋白相当，但是与基质NAD的亲和力则要低100万倍。

-总结-

虽然NAD不良影响之前普遍存在，也尚未得到完全补救。但是为数众多厂家无论如何在立体化学发光免疫验证中都用作（肽键霉）亲和伦-NAD控制系统，一个原因是早期联合开发过程中都运用于了此类Mode，如果摈弃或改变这种Mode，无异于再一联合开发还原剂，修正仪器控制系统，并且需要再一进行登记登载，需要花费大量的余力，以及浪费更加长的时间。另一个原因是运用于这种Mode尽可能简立体化还原剂联合开发成品，并且在一定程度上降低还原剂价格。不管出新于何种原因，（肽键霉）亲和伦-NAD控制系统无论如何普遍应用于免疫验证中都，但是NAD不良影响是一个极为重要的难题。